发布时间：2014-12-09 来源：人大经济论坛

猪脑提取物对阿尔茨海默病大鼠学习记忆的保护作用_药学专业毕业论文     【摘要】  目的观察猪脑提取物对痴呆大鼠学习记忆的影响，并探讨其作用机制。方法海马CA1区微量注射喹啉酸造成Alzheimer病(AD)大鼠。将大鼠随机分成假损伤组、对照组、猪脑提取物组、猪脑提取物预防给药组及阳性药脑活素组。肌肉注射给药，连续给药30 d。采用Y-迷宫和被动回避性跳台法测定大鼠的学习记忆水平;分光光度法测定大脑皮质MDA的含量，及海马的NO的含量和NOS的活性。结果与对照组大鼠相比，给予猪脑提取物第10，20，30天后，大鼠迷宫、跳台的错误次数明显减少;给药30 d后，大鼠大脑皮质MDA，海马NO含量和NOS活性明显降低。结论猪脑提取物可提高痴呆大鼠学习记忆能力，其作用机制与其降低大鼠脑内的MDA、NO、NOS有关。     【关键词】  猪脑提取物; 阿尔茨海默病; 学习记忆      阿尔茨海默病(Alzheimer's Disease，AD)是一种与年龄高度相关的，以进行性学习记忆、认知功能减退为主要临床症状，以老年斑、神经元纤维缠结、神经元丢失为主要病理改变的中枢神经系统退行性疾病，其发病机制目前尚不清楚[1]。在发达国家AD已成为继心脏病、癌症、中风之后人类疾病第4位的死因，因此积极开展对AD的研究具有重要意义。 动物脑提取物含有小分子肽、神经生长因子等多种活性成分，可用于治疗AD等一些脑功能性疾病[2～4]，目前已有众多的脑提取物产品进入临床，国外生产的脑活素已被广泛应用于阿尔茨海默病、脑中风、脑震荡、脑损伤的治疗，取得了一定的疗效。我们利用新生猪脑制备猪脑提取物，并对其进行药效和机制的初步探讨。 1 材料与仪器 1.1 动物雄性Wistar大鼠，体质量(280±25)g，由江苏大学实验动物中心提供。 1.2 试剂喹啉酸(quinolinic acid，QA)系Sigma化学公司产品;脑活素由南京金康制药有限公司提供(批号：000110);丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)测定试剂盒为南京建成生物工程研究所产品;其余为国产分析纯。 1.3 仪器江湾Ⅰ型C脑立体定位仪，为第二军医大学产品;MG-2迷宫刺激器,江苏省张家港市生物医学仪器厂产品;大鼠跳台由中国医学科学院药物研究所研制;721分光光度计，上海第三分析仪器厂产品。Super T21型高速冷冻离心机，美国杜邦公司产品。 2 方法 2.1 猪脑提取物制备称取一定量新生猪脑组织，去脂肪以1∶2比例加入去离子水，匀浆打碎，反复冻融3～4次使细胞破碎，4℃ 8 000 r/min离心15 min，取上清用截至分子量1万的超滤膜超滤，获得分子量1万以下的组份，冻干浓缩，即为有活性的猪脑提取物[4]。 2.2 分组与给药将大鼠随机分成假损伤组、模型对照组、猪脑提取物组、猪脑提取物预防给药组(0.15 mg·kg-1)及阳性药脑活素组(4 mg·kg-1)。其中按猪脑提取物剂量分成高(0.75 mg·kg-1)、中(0.15 mg·kg-1)、低(0.03 mg·kg-1)剂量组。共7组，每组13只，肌肉注射给药，连续给药30 d;假损伤组及模型对照组给生理盐水，其中预防给药组术前给药7 d。 2.3 损毁海马Glu神经元的AD动物模型制备依据文献方法[5，6]，对双侧海马CA1区立体定位后，将用0.01 mol·L-1 PBS缓冲液溶解的QA 2 μl(含150 nmol)缓慢注入海马CA1区，假损伤组注入同等体积PBS。每侧注入时间为5 min，留针5 min，起针局部消毒后缝合皮肤。术后连续3 d肌注青霉素防止感染。 2.4 Y-迷宫分辨学习能力检测依据文献方法[5，6]，将大鼠置于迷路箱的任一支臂中，适应5 min，在灯亮5 s时，给于电刺激(70 V、延迟5 s)直至大鼠最终逃避到安全区后10 s，作为1次测验。凡大鼠受电击能从起步区逃至有灯光信号的安全区为正确反应，否则为错误反应。每次训练后休息30 s，每天训练10次，记录错误次数A/10，作为学习成绩。24 h后重复以上试验，记录上述指标，作为记忆成绩。分别于术前、术后10，20，30 d进行测试，均于下午14:00～17:00进行。 2.5 被动回避性跳台试验各组动物给药后1 h进行被动回避性跳台试验[7]。将大鼠放入实验箱内，适应5 min后，通以36 V交流电以大鼠从台上跳下双足接触电珊遭到电击为错误反应，记录3 min内出现错误的次数，训练后24 h进行测验，记录3 min内出现错误的次数作为记忆成绩。分别于术前、术后10，20，30 d进行测试，均于上午8:00～11:00进行。 2.6 生化指标MDA、NO、NOS的检测快速断头取海马组织及大脑皮质，称重，按1∶10(W/V)加入预冷的匀浆介质(0.01 mol·L-1蔗糖，0.01 mol·L-1 Tris-HCl，0.000 1 mol·L-1EDTA-2Na溶液，pH7.4)，冰浴匀浆5 min;以2 000 r/min离心10 min，取上清4°C 13 000 r/min离心18 min，取海马上清液检测NO含量和NOS活性;取大脑皮质上清液检测MDA的含量。MDA，NO，NOS的测定方法按其各自分析试剂盒操作要求进行。样品蛋白定量采用改良Lowry法测定。 2.7 统计分析实验数据采用统计软件SPSS11.0进行单因素方差分析，实验结果采用±s表示，P0.05为组间有显著差异，P0.01为组间有极显著差异。 3 结果