荧光Cy5DNA扩增及酶切产物分离–检测

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1 论文标题：荧光Cy5DNA扩增及酶切产物分离–检测

2 作者信息：郑园霞, 张 毅, 李雪刚：河南农业大学，生命科学学院，河南 郑州；刘亮伟：河南农业大学，生命科学学院，河南 郑州；农业部农业酶工程重点实验室，河南 郑州

3 出处和链接：郑园霞, 张毅, 李雪刚, 刘亮伟. 荧光Cy5DNA扩增及酶切产物分离–检测[J]. 微生物前沿, 2022, 11(4): 241-250. https://doi.org/10.12677/AMB.2022.114030
4 摘要：dNTPs加入一定比例Cy5-dATP可以扩增荧光Cy5DNA，用于T5外切酶(T5exo)类DNA酶检测，关键是酶切产物分离–检测。[方法]本研究以1/1000 Cy5-dATP的dNTPs扩增5851 bp荧光Cy5DNA pET28a-xyn。基于纯化柱吸附DNA原理，首先确定2倍P3缓冲液(2×P3)为纯化柱吸附DNA最小用量，进而用纯化柱以2×P3分离Cy5DNA溶液、等量Cy5DNA经T5exo酶切反应液(Cy5DNA-T5exo)，分别得到洗脱液(含有Cy5DNA)和滤出液(含有酶切产物Cy5-dATP)。[结果]酶标仪定量检测显示，含120 ng Cy5DNA洗脱液荧光值5824、滤出液0。含120 ng Cy5DNA-T5exo滤出液荧光值7573、洗脱液0。激光共聚焦显微镜定性检测显示，Cy5DNA洗脱液有荧光、滤出液无。Cy5DNA-T5exo滤出液有荧光、洗脱液无。定量和定性检测结果与纯化柱吸附DNA、滤出酶切产物原理和功能相同。进而分析了Cy5DNA浓度、Cy5-dATP浓度与荧光值的定量关系。[结论]荧光Cy5DNA成功扩增，其酶切产物经纯化柱以2×P3成功分离，为荧光DNA扩增和用于DNA酶活性检测奠定了基础。

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关键词：DNA 生命科学学院 重点实验室 生命科学 河南农业

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