楼主: GraphPad_China
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双因素方差分析(2) GraphPad Prism [推广有奖]

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GraphPad_China 在职认证  发表于 2024-7-1 11:56:44 |AI写论文

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何时指定哪个设计适用于这个实验?

上面的例子表明,一个分组数据集可以代表四种不同的实验设计。在创建数据表时,不需要区分这些设计。数据表并不“知道”数据是否为重复度量。在选择如何绘制数据图时,您应该考虑到实验设计。在进行双因素方差分析时,必须考虑到这一点。在双因素方差分析对话框的第一个选项卡上,您将指定实验设计。


Lingo:“重复测量” vs “随机分组”实验

当您对每个受试者进行重复测量时,项repeated measures是恰当的。

有些实验包括匹配但不重复的测量。项randomized-block描述了这类实验。例如,假设这三行是三个不同的细胞系。所有的Y1数据来自一个实验,所有的Y2数据来自一个月后的另一个实验。第1行A列Y1(23)和第1行B列Y1(28)的值来自同一实验(相同的细胞传代,相同的试剂)。匹配是按行进行的。


随机分组数据与重复测量数据的分析方法相同。Prism总是使用重复测量这个项,所以当您的实验遵循随机分组设计时,您应该选择重复测量分析。


运行ANOVA


  • 从数据表中,单击分析工具栏。 8.gif
  • 从分组分析列表中选择双因素方差分析。
  • 在第一个选项卡(RM设计)上选择您的实验设计。
  • 在第二个(RM分析)选项卡上,选择是否要运行重复测量ANOVA或混合模型。
  • 在第三个(Factor Names)选项卡上,可选地命名定义行和列的分组变量。对于上面显示的示例,您可以将列标记为“治疗”,将行标记为“剂量”。每个匹配的集合可以命名为“动物”。
  • 在第四个(Multiple Comparisons)选项卡上,选择您的目标(如果有的话)进行多重比较。
  • 在第五个(Options)选项卡上,选择您想要的多个比较测试的详细信息。
  • 在最后一个(Residuals)选项卡上,选择是否以及如何绘制残差,以及是否要测试它们的正态性和相等变异性(均方差)。



图表数据为双因素重复测量方差分析


当用重复测量的数据绘制图表时,选择一个连接代表单个点的符号的图表,以便图表显示数据的性质。为此,选择New Graph对话框的“individual values”选项卡,然后选择右边两种图形类型中的一种。下面的示例显示了用于选择匹配值是否分布在一行中的图表。右边的下一个图显示的是匹配值堆叠的情况。如果在两个方向上都有匹配,则需要选择绘制哪个,因为没有图形(无论如何在Prism中)可以显示两个分组变量中的匹配。


9.png


Prism无法在庞大的数据集上运行重复测量的双因素方差分析



Prism不能运行重复测量双因素方差分析与庞大的数据集,并呈现一个消息告诉您。How huge is huge? Really big!


每一列表示一个不同的时间点,因此匹配的值分布在一行中

Prism无法分析(行数)2 *列数*子列数*(列数+子列数)>268,435,456的表

每一行代表一个不同的时间点,因此匹配的值被堆叠到一个子列中

Prism无法分析如下表:行数*(列数)2 *子列数*(行数+子列数)>268,435,456

两个因素的重复测量


Prism可以处理任何可输入的表。



缺失值和双因素方差分析


用普通(非重复测量)方差分析缺失值


10.gif


注意,有一个值是空的。有一些缺失值是可以的,但是为了适应完整的模型(列效应、行效应和列/行交互),必须在每个数据集的每行中至少有一个值。


由于没有治疗女性的数据,下表不能使用完整模型进行双因素方差分析。每个单元格必须至少有一个值。但是,如果您选择拟合仅主要效应的模型,Prism仍然能够分析该数据(不包括交互项)。


11.gif


如果您输入的是mean, SD(或SEM)和n,如果n并不总是相同,那是可以的,但是如果您留下n空白或输入0,ANOVA将不起作用。

用重复测量方差分析缺失值


缺失值和重复测量双因素方差分析有两种不同的情况:


  • Prism可以计算重复测量的双因素方差分析,如果治疗组有不同数量的参与者,但每个参与者(实验,垃圾,…)在每次重复时都有数据。
  • Prism(从Prism 8开始)也可以做重复测量的等效双因素方差分析,如果一些重复的值丢失,只要没有太多的点丢失,它们完全是随机丢失的。如果一些值因为太大而无法测量而丢失,那么任何结果都将是无意义的,因为丢失的值实际上代表表中的最大值。但是,如果一些值完全是随机丢失的,Prism使用一个可以拟合的混合效应模型。




混淆点:有定量因素的方差分析


带有定量因子的方差分析

当其中一个因素是定量的,例如比较时间过程或剂量反应曲线时,有时使用双因素方差分析。在这些情况下,其中一个因素是剂量或时间,您已将其设置为几个(或多个)离散值之一。

方差分析不关注时间点(或剂量)的顺序。想想看。您的实验的全部意义可能是观察一种趋势或剂量-反应关系。但方差分析计算完全忽略了时间点或剂量的顺序。如果您随机打乱时间点或剂量,双因素方差分析将报告相同的结果。方差分析处理不同时间点或不同剂量的方法,与处理不同药物、不同基因型或不同国家的方法完全相同。


由于方差分析忽略了实验的整个点,当其中一个因素是定量的,考虑使用替代(回归)方法。在某些情况下,您没有足够的数据或足够的理论来拟合曲线,所以方差分析可能是一个合理的分析。


用定量因子解释P值

让我们想象您在六个时间点比较两种治疗方法。


双因素方差分析将报告三个P值:


  • 一个P值检验零假设,即时间对结果没有影响。在很多情况下,您知道结果会随着时间的推移而改变。所以您才上了时间课。由于时间效应的P值较小,因此它不能告诉您太多信息。
  • 另一个P值检验零假设,即平均而言,处理没有差异。在某些情况下,这个假设可能值得检验。但在很多情况下,您期望在早期时间点没有差异,只关心后期时间点的差异。在这些情况下,测试平均治疗效果可能没有太大帮助。
  • 第三个P值检验交互作用。零假设是在所有时间点处理之间的任何差异都是相同的。但是如果您在时间0或早期的时间点收集数据,您不会期望发现任何差异。您的实验实际上是为了询问以后的时间点。在这种情况下,您期望进行交互,因此为交互寻找较小的P值并不能帮助您理解数据。如果治疗之间的差异在某些时间点变得更大,然后在稍后的时间点变得更小,那么它就更没用了。
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用定量因素解释多重比较检验

多重比较测试呢?

一些科学家喜欢问,反应变化在统计上显著的最低剂量(或时间)是什么。多重比较测试可以给出答案,但答案取决于样本量。在每条曲线上运行更多的受试者,或更多的剂量或时间点,答案就会改变。如果有足够大的样本量(在每个剂量或时间点),您会发现在很小的剂量或很早的时间点上有统计学意义(但生物学上微不足道)的效应。如果在每个剂量或时间点上重复次数较少,则在剂量较大或时间点较晚时才会看到统计学意义。因为要求能产生“显著”效果的最小剂量并没有提出有关系统的基本问题,所以结果可能没有帮助。

如果您想知道最低有效剂量,考虑找出比您根据生理学(或其他科学背景)设定的阈值更大的最低剂量。例如,找出使脉搏率每分钟增加10次以上的最小剂量。这种方法可以得出有用的答案。寻找能导致“显著”效应的最小剂量则不然。

如果您看一下所有的多重比较测试(而不仅仅是问哪个剂量最低或哪个时间点会产生“显著”影响),您会得到毫无意义的结果。您可能会发现,在时间点3、5、6和9,差异在统计上是显著的,但在时间点1、2、4、7、8和10,差异就不显著了。您对此有何解释?知道治疗在哪个剂量或时间点具有统计学意义,很少能帮助您理解系统的生物学,也很少能帮助您设计新的实验。


双因素方差分析的替代方法

双因素方差分析的替代方法是什么?

如果您有一个重复测量的设计,考虑使用这种替代方差分析,即Will G Hopkins称之为主体内建模。

首先,以某种生物学上有意义的方式量化每个主题的数据。也许这就是曲线下的面积。也许是峰值水平。也许是达到顶峰的时候了。也许您可以用非线性回归拟合曲线并确定速率常数或斜率。

现在取这些值(面积或速率常数…),并使用t检验(如果两个处理)或单因素方差分析(如果三个或更多)比较各组受试者之间的差异。与双因素方差分析不同,这种分析遵循实验的科学逻辑,因此得出的结果是可以理解的,可以引导您进入下一步(设计更好的实验)。



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关键词:GraphPad GRAPH Prism 方差分析 GRAP

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yesbb 发表于 2024-7-2 11:17:18 来自手机
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