小鼠胚胎成纤维细胞重编过程中p53、MDM2、Aurka基因相关性的实验研究
目的:研究携带有转录因子(Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc)的腺病毒感染小鼠胚胎成纤维细胞(MEFc),通过诱导出诱导多能干细胞(iPSC),并分析在重编程过程中p53基因、MDM2基因、Aurka基因的变化规律,为提高诱导多能干细胞诱导效率提供思路。方法:1.对前期冻存的MEFc进行复苏,待MEFc生长良好后,加入带有4个转录因子(OSCK)的腺病毒,反复感染两次后,观察细胞形态结构变化;2.对诱导出的细胞进行多能性鉴定:通过对细胞形态学观察、成瘤性、碱性磷酸酶(偶氮偶联法)染色,及干细胞标志基因检测;3.将转染的细胞分别按照诱导前、诱导后24h、诱导后1w、诱导后2w四个时间段,利用Real-Time PCR技术,多次测量p53基因、MDM2基因、Aurka基因的转录情况。
实验数据应用SPSS17.0软件进行统计学分析,各个基因内各个时间的数据采用单因素方差分析,统计学检验标准为P<0.05。结果:1.对诱导的细胞进行多能性鉴定:a、形态学变化:可观察到细胞边界轮廓清楚,胞体较小鼠成纤维细 ...


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