超级感受态细胞的制备

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超级感受态细胞的制备
1.第一天晚上
，将置于液氮中保存的大肠杆菌（
DH5α）画线在
LB平板上，
37℃倒置培养活化（一般需
12-16h
也就是过夜即可，时间过长易有杂菌的微克隆）。
2.第二天早上
，距前一天晚上约
13个小时将划线的平板从
37度拿出4度放置，
晚上挑取一个经
37℃培养过夜活化的单菌落（
2-3mm
直径），接种至试管中的
3mlSOB
培养液中，
200转过夜培养
12-16h
；3.第三天早上
，将上述培养物接种于三个盛有
100ml
的SOB培养液的
250ml
锥形瓶中；
4.培养约2小时后，
测量培养物的
OD值，以后每45min
测定一次；
5.当培养物的
OD值达到0.6-0.7
时，将培养瓶置于冰上
10min
；6.（提前预冷离心机，可将
50mL
离心管以及
TB缓冲液放入制冰机中预冷
）将100ml
菌液分装到四个
50mL
离心管中，
4℃，4000rpm
离心10min
；7.倒去培养液，将离心管倒扣在吸水纸上
2min
以吸干剩余液体；
8.用4mlTB
缓冲液分别将
4个离心管的沉淀悬浮，并至一个离心管加至
30ml
预冷的TB ...

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关键词：大肠杆菌 Min 培养液 制冰机 吸水纸