肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制研究

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肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制研究
目的：本研究通过对86株碳青霉烯类抗生素耐药或敏感性降低的肠杆菌科细菌进行β-内酰胺酶、外膜蛋白和外排泵检测,旨在阐明肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素耐药的分子机制；通过碳青霉烯酶基因周围序列分析,探讨碳青霉烯耐药基因的传播机制。方法：琼脂稀释法测定抗生素对细菌的最低抑菌浓度(MIC)。
脉冲场凝胶电泳和肠杆菌基因间重复性一致序列-PCR (ERIC-PCR)分析菌株之间的同源性。等电聚焦电泳、PCR扩增和序列分析确定菌株所产β-内酰胺酶的类型。
质粒接合试验、质粒消除试验和Southern blot杂交验证碳青霉烯耐药基因是否位于质粒上。提取细菌的外膜蛋白作十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),检测外膜蛋白表达情况。
羰酰氰氯苯腙(CCCP)抑制试验检测细菌中是否存在针对碳青霉烯类抗生素的外排泵。用限制性内切酶EcoRI和HindⅢ对碳青霉烯酶基因编码质粒进行酶切分型。
对部分碳青霉烯酶基因编码质粒进行测序,分析碳青霉烯酶基因周围DNA序列的基因结构。结果：86株菌株对碳青霉烯有不同程度的耐药,亚胺培南、美罗培南和厄他培南的 ...

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关键词：抗生素 southern south 聚丙烯酰胺 DNA序列