屋尘螨Ⅰ、Ⅱ类变应原T细胞表位融合肽疫苗的初步研究

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屋尘螨Ⅰ、Ⅱ类变应原T细胞表位融合肽疫苗的初步研究
目的构建编码屋尘螨变应原Derp1和Derp2的T细胞表位融合肽嵌合基因的原核表达载体pET-28a(+)-T1-8并进行大规模的诱导表达和纯化,并对纯化产物的特异性免疫治疗效果进行分析。方法1)将Der p1和Der p2的8个T细胞表位用“GPGPG"序列间隔串联为T1-8融合肽,利用DNA重组技术合成T1-8融合肽基因并插入质粒pET-28a(+),构建pET-28a(+)-T1-8载体,限制性内切酶双酶切验证并测序。
2)将重组表达载体pET-28a(+)-T1-8转化到大肠埃希菌E.coil BL21(DE3)感受态中,菌落PCR筛选阳性克隆菌。3)用IPTG小剂量诱导表达,优化条件后进行大剂量诱导表达并纯化,SDS-PAGE和Western blot (WB)验证表达和纯化产物。
4)将40只BALB/c雌性小鼠随机分为4组,分别为阴性对照组(PBS组)、阳性对照组(Asthma组)变应原rDer p1和rDer p2混悬液治疗组(rDer p1/rDer p2组)以及T1-8融合肽治疗组(T1-8组)。用屋尘螨粗提取液( ...

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关键词：变应原 Western 原核表达载体 Wester Stern