无抗黑曲霉表达系统构建及脂肪酶的表达

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无抗黑曲霉表达系统构建及脂肪酶的表达
黑曲霉作为一种重要的工业生产菌株,已逐步开发成为一种重要的酶表达系统。在本研究中,首先选择一株低蛋白背景且潮霉素敏感菌株为表达宿主,并对农杆菌介导转化法和PEG-原生质体转化法进行条件优化,然后以脂肪酶为模式酶在黑曲霉中进行同源/异源脂肪酶的表达。
通过转录和转录后水平改造提高了黑曲霉脂肪酶ANL的表达量,并进行了酶学性质研究。最后初步开展了CRISPR/cas9技术在黑曲霉表达系统中的应用,构建了尿嘧啶缺陷型菌株。
主要结果如下:（1）对农杆菌介导转化和PEG-原生质体转化两种方法进行了条件优化。优化后农杆菌介导转化的条件是不萌发的新鲜孢子与OD<sub>600</sub>培养至0.9-1.0的农杆菌以1:1的比例混合后,在乙酰丁香酮浓度为200μmol·L<sup>-1</sup>的IM平板上,23 <sup>o</sup>C避光培养48 h后进行转膜。
最佳转化效率大约为每10<sup>6</sup>个孢子获得60±5个转化子,并且阳性率保持在90%以上。原生质体制备条件为:10<sup>7</sup>个?mL<sup>-1</sup>黑曲霉 ...

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关键词：黑曲霉 Crisp 工业生产 PEG Mol