His-tag原核蛋白提取

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构建的原核表达载体转化
BL-21或者
Rosetta
表达菌株，用保存的菌液或者单克隆接在
相应抗性的LB培养基
中，37℃过夜培养
将小摇的菌株接在
250ml LB
中，使OD达到0.1，
加入对应抗生素
。28℃摇菌
，约2到3个
小时后，待OD达到0.6时
，用IPTG（0.2
mM到2mM
）诱导蛋白表达
。同时加入40
%葡萄糖溶液
2~5ml，放入30/
28/18℃摇床生长
注意，接大摇时，
LB体积
应小于四分之一的三角瓶体积，特别是对于分子量大的蛋白
次日集菌，4℃离心机6，000到8,000
rpm，离心10至15分钟
集菌倒掉上清
，加入10
至3ml（由菌量确定）的对应缓冲液重悬
Lysis buffer/His
标签：NaCl 300mM 5.3g
磷酸氢二钠50mM磷酸二氢钠
50mM用KOH固体将PH调至7.5Buffer
中加入PMSF
细胞破碎
细胞破碎后
的液体移入
50毫升圆底管，
用对应的缓冲液配平后
12,000
rpm，4℃离心15分钟对应的beads
用缓冲液平衡
2次后，每个样品中加入约
25微升4℃binding
1~2小时Bind ...

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关键词：tag rosetta Binding Buffer 原核表达载体