电转酿酒酵母实验步骤

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电转酿酒酵母实验步骤（以含有单杂载体
pAbAi
整合后的
Y1H菌株为例）
1）将转化用酵母菌株的单菌落接种于
100mlSD
/-Ura
培养基中，
30℃过夜培养至
OD600=1.3
，时间大概
23h;3）酵母菌液
置于冰上
10min，然后于4℃4000g
(1500r/min)
离心收获培养细胞，将
两管细胞置于
一管，加入50ml冰冷的灭菌水
重悬洗涤，重复两次
。6）在离心后的酵母细胞
中加入10ml冰冷的1mol/L
山梨醇，离心。然后加入0.5ml冰冷的1mol/L
山梨醇重悬。7）电转化：
在无菌冰冷的微量离心管中加入
40ul
酵母菌细胞和小于等于
100ng
待转化的
DNA（体积小于
5ul），混匀。转移至冰冷的电转槽中，置于
冰上5min，然后进行电击，
1.5KV
档，电击时间在
5.0-5.4ms
。8）立即往电击槽中加入
500ul冰冷的1mol/L
山梨醇，轻轻吹吸混匀，
吸入收集管中。在收集管中
加入适量液体筛选培养基，
30℃摇床150RPM
孵育1-2h。9）直接涂布在选择培养基平板上，于
30℃培养3-6天，直到平板上出现菌落。
注意：转 ...

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关键词：实验步骤 培养基 Mol Min 酵母菌