小鼠口腔癌淋巴道转移模型颌下淋巴结播散细胞TP53基因纯合性缺失的初步研究

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小鼠口腔癌淋巴道转移模型颌下淋巴结播散细胞TP53基因纯合性缺失的初步研究
目的：(1)初步探讨小鼠口腔癌淋巴道转移模型颌下淋巴结播散细胞(DTC)DNA的获取方法。(2)初步观察和比较小鼠口腔癌模型颌下淋巴结DTC与其原发灶在各病变时期TP53基因纯合性缺失的情况及探讨其意义。
方法：(1)4NQO饮水法建立小鼠口腔癌淋巴道转移模型,收集其舌部组织和颌下淋巴结,分为正常、轻至中度异常增生、重度异常增生,口腔鳞癌无淋巴结转移、伴淋巴结转移5组。(2)舌部组织DNA直接提取；淋巴结组织行连续冰冻切片,pan-CK免疫组化染色检测CK阳性细胞(CK+)有无并明确定位,取邻近切片HE染色后使用激光捕获显微切割技术(LCM)获取CK+细胞,全基因组扩增技术(WGA)扩增获其DNA；(4)聚合酶链反应(PCR)检测淋巴结CK+细胞TP53基因的第5至第8外显子纯合性缺失情况,并与小鼠正常淋巴结以及口腔原发灶组织比较。

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关键词：口腔癌 淋巴结 DNA 基因组 PCR