12-农杆菌感受态细胞的制备与转化

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农杆菌感受态细胞的制备
［实验原理］
在利用根癌农杆菌介导的基因转化中，首先要获得含有目的基因的农杆菌工程菌株。
在基因工程操作中，感受态细胞的制备和质粒的转化是一项基本技术。感受态是细菌细胞具有的能够接受外源DNA的一种特殊生理状态。农杆菌的感受态可用CaCl
2处理而诱导产生。将正在生长的农杆菌细胞加入到低渗的CaCl
2溶液中，0℃下处理便会使细菌细胞膜的透性发生改变，此时的细胞呈现出感受态。制备好的农杆菌感受态细胞迅速冷冻于-70℃可保存相当一段时间而不会对其转化效率有太大的影响。
［实验仪器、材料和试剂］
一、仪器：超净工作台，恒温摇床，冷冻高速离心机，高压灭菌锅，冰箱，-70℃超低温冰柜，分光光度计，接种针，10ml试管，50ml离心管，1.5ml离心管，冰浴，微量进样器及吸头。
以上玻璃仪器和离心管需在用前灭菌，灭菌条件：
120℃，15分钟。二、材料：土壤农杆菌
LBA4404
菌株或其它农杆菌菌株
三、试剂：
YEB液体培养基（
1L）：酵母提取物
1g，牛肉膏
5g，蛋白胨
5g，蔗糖5g，MgSO
4·7H2O 0.5g
，pH7.0
，高压灭菌。
利福平（
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关键词：基因工程 实验仪器 ACL 培养基 细胞膜