发帖
雷达卡
载体构建
一、原理依赖于限制性核酸内切酶，
DNA连接酶和其他修饰酶的作用，分别对目的基因和载体
DNA进行适当切割和修饰后，将二者连接在一起，再导入宿主细胞，实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。
二、操作步骤
1、摇菌（制作感受态细胞备用）
取装有液体培养基的
3ml试管两支（依情况而定），每管加
40-100
μl菌种，过夜摇。
2、提质粒（也就是载体）
依照提质粒试剂盒中的说明书操作（根据情况最后一步洗脱时可以多洗
1-2次）。3、酶切（双酶切产生
粘性末端）
将加好的
EP管置于37℃保温1-2h
。（依照提酶切
的具体步骤操作；
为了达到最佳
酶切的效果，最好根据所选用的
酶确定所需要的反应温度）
4、电泳检测
将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，检测酶
切是否成功。回收胶：
琼脂糖与缓冲液一比一制胶，
经过切胶回收目的产物，也有目的产物纯化的功能；
检测胶：
琼脂糖与缓冲液一比二制胶，为了检测目的条带与预期是否相符。
切胶回收与产物纯化是差不多的过程，所达到的目的是一样的：
切胶回收也是一种纯化过程，它能去除非目的片段，然后用回收试剂盒进行纯化，能将很不纯的
DNA溶液纯化；产物 ...
京公网安备 11010802022788号
