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食品级酿酒酵母高效分泌/展示表达系统构建
基因工程酵母菌在食品工业中的应用逐渐普遍,但重组菌抗生素抗性标记的存在对食品安全具有潜在隐患。此外,较低的生产成本、简单方便的下游操作技术和高水平的表达量等是工业大规模生产重组蛋白必须具备的特点。
针对这些问题,本课题根据半乳糖-葡萄糖对GAL基因家族诱导-抑制效应以及GAL4p对GAL基因的调控机制,采用同源重组技术分步敲除了工业多倍体酿酒酵母MS-1染色体上的GAL1基因,并将GAL4基因整合到GALl基因位点,构建了不同GAL基因型的重组酵母SG1、DG115.DPG65和GQ21。同时,选用α-半乳糖苷酶作为食品级选择标记、β-1,3-1,4-葡聚糖酶作为报告基因构建了在GALl启动子和MFαl信号肽控制指导下的食品级分泌表达载体YGMPA-PM:并以α-凝集素C-端320个氨基酸为锚定序列,构建了能够展示表达p-1,3-1,4-葡聚糖酶的食品级展示表达载体YGMPNA-PM.将构建的载体和不同GAL基因型的重组酵母相结合,得到了适合工业化生产的食品级高效分泌表达系统和食品级高效展示表达系统。
主要研究结果如下：扩增了GAL4结构基因全 ...

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关键词：生产成本 食品工业 重组蛋白 食品安全 基因工程