酵母双杂交实验流程

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模块七   蛋白质之间的相互作用
1. 实验目的
本实验以重组质粒和酵母细胞为材料，学习检测蛋白质相互作用的基本原理和技术方法。主要
介绍酵母双杂交的基本原理与操作技术；让学生了解和掌握酵母双杂交系统的应用；掌握酵母感受
态的制备的基本原理和主要的操作步骤。
2. 实验原理
1989 年 Fields 和 Song 等人根据当时人们对真核生物转录起始过程调控的认识（即细胞内基因
转录的起始需要转录激活因子的参与），提出并建立了酵母双杂交系统。该系统作为发现和研究活细
胞体内的蛋白质与蛋白质之间的相互作用的技术平台，近几年得到了广泛的运用和发展。
相比于其它蛋白质筛选系统，酵母双杂交系统具有以下优点：（1）检测在真核活细胞内进行，
在一定程度上代表细胞内的真实情况。（2）作用信号是在融合基因表达后，在细胞内重建转录因子
的作用而给出的，省去了纯化蛋白质的繁琐步骤。（3）检测结果是基因表达产物的积累效应，因而
可检测存在于蛋白质之间的微弱或暂时的相互作用。（4）酵母双杂交系统可采用不同组织、器官、
细胞类型和分化时期材料构建 cDNA 文库，能分析细胞质、细胞核及膜结合蛋白等多种不同 ...

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关键词：fields field 相互作用 基本原理 基因表达