慢病毒载体构建步骤研究

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一、简介
慢病毒（Lentivirus）载体是以 HIV-1（人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基
因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到
宿主染色体上，从而达到持久性表达。
目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效
果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是
短暂的，因而使其应用受到较大的限制。采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体, 然
后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因
表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥
长期阻断基因表达的作用。慢病毒载体能够产生表达 shRNA 的高滴度的慢病毒，在周期
性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代细胞中表达 shRNA，实现在多种类型
的细胞和转基因小鼠中特异而稳定的基因表达的功能性沉默，为在原代的人和动物细胞组
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关键词：virus 基因表达 抑制作用 Sir 持久性