发布时间：2014-12-23 来源：人大经济论坛

CD83、CD1a标记肿瘤浸润性树突状细胞在大肠癌中的表达及其预后意_药学专业毕业论文 【摘要】  目的探讨肿瘤浸润性树突状细胞(TIDC)在大肠癌组织中的表达及预后意义。方法收集≥5年生存组和3年死亡组大肠癌病例各30例，免疫组化和流式细胞术分别检测大肠癌组织内TIDC的CD83、CD1a表达状况，分析其与大肠癌临床病理特点和预后的关系。结果CD83、CD1a的表达与大肠癌的分化程度、淋巴结转移无关，与Dukes分期和预后相关。免疫组化检测显示，60例大肠癌组织中19例检测到CD83阳性表达，24例检测到CD1a阳性表达。CD83、CD1a的表达随着Dukes分期的升高而降低、≥5年生存组表达高于3年死亡组，差异有统计学意义(P0.05)。流式细胞术检测到低水平CD83(60/60)、CD1a(60/60)和Ki-67(60/60)表达。在大肠癌组织的不同Dukes分期间，CD83、CD1a在A期+B期大肠癌组织中的表达高于C期+D期大肠癌组织，差异有统计学意义(P0.05);CD1a在≥5年生存组表达高于3年死亡组，差异有统计学意义(P0.05)。结论大肠癌组织中TIDC的特征性标记物CD83、CD1a的表达与预后相关，可以作为检测大肠癌预后的参考指标。 【关键词】  大肠癌;肿瘤浸润性树突状细胞;CD83;CD1a ABSTRACT: ObjectiveTo explore the expression of tumor-infiltrating dendritic cells (TIDC) in colorectal carcinoma and its prognostic significance.　　MethodsThirty cases of colorectal cancer patients were selected from ≥5-year survival group and 3-year death group, respectively. Immunohistochemical staining and flow cytometry were used to detect the expression of CD83 and CD1a of TIDC in colorectal cancer tissues; the relationship of the expression with clinico- pathological features and prognosis of colorectal cancer were analyzed.ResultsThe expression of CD83 and CD1a had no correlation with differentiation degree of colorectal cancer, lymph node metastasis, Dukes staging or prognosis. Immunohistochemistry showed that 19 patients with CD83 positive expression and 24 with CD1a positive expression were detected in 60 cases of colorectal cancer, The expression of CD83 and CD1a decreased with Dukes staging increase; the expression was significantly higher in ≥5-year survival group than in 3-year death group (P0.05). Flow cytometry detected low level of CD83 (60/60), CD1a (60/60), and Ki-67 (60/60) expressions. During different Dukes staging of colorectal carcinoma tissues, CD83 and CD1a had a significantly higher expression in A + B phase of colorectal cancer tissues than in C + D phase (P0.05). CD1a had a significantly higher expression in ≥5-year survival group than in 3-year death group (P0.05 ).ConclusionThe expression of CD83 and CD1a, TIDC characteristic markers in colorectal carcinoma, is related with and the prognosis; therefore, it can be used as a reference indicator to detect the prognosis of colorectal carcinoma. KEY WORDS: colorectal carcinoma; tumor-infiltrating dendritic cell; CD83; CD1a 树突状细胞(dendritic cell, DC)是目前所知机体内功能最强的抗原提呈细胞，是机体免疫应答的始动者.肿瘤组织内浸润性树突状细胞(tumor infiltrating dendritic cell, TIDC)的数量与功能对机体免疫有重要提示意义，与肿瘤的临床分期和预后相关[1]。TIDC被认为是机体对肿瘤的一种局部免疫反应。CD83和CD1a是鉴定人外周血中DC的最好标志。本研究采用免疫组化和流式细胞术分别检测大肠癌组织中CD83和CD1a的表达情况，分析二者与大肠癌临床病理特点和预后的关系，进而了解肿瘤组织局部免疫状况对预后的影响。 1材料与方法 1.1标本来源收集遵义医学院附属医院普外科自1990年6月至2006年6月经病理确诊的60例大肠癌石蜡标本，均为原发病灶(临床资料完整)，男41例，女29例，年龄26～78(中位数52)岁;高分化30例，中分化9例，低分化21例;Dukes分期：A期6例，B期25例，C期21例，D期8例;伴有淋巴结转移14例，无淋巴结转移46例;≥5年生存者30例，3年死亡者30例。所有患者均为第一次手术，术前未经任何放化疗，随访至术后5年以上(随访资料完整)。 1.2主要试剂CD83单克隆抗体(HB15a：sc-19677)、CD1a单克隆抗体(GM357101/02/04)、Envision试剂盒(二抗、三抗试剂)均购于上海基因科技有限公司。流式细胞仪(FACS Calibur，Becton Dickinson, USA)，PE标记的抗CD83抗体、APC标记的抗CD1a抗体，均为美国BD公司产品。 1.3免疫组化染色采用SABC法检测操作流程，具体操作步骤按照说明书进行。以试剂公司提供的阳性切片为阳性对照,以PBS代替一抗作为阴性对照。判定结果：CD83、CD1a均定位于胞膜或胞浆。以细胞膜、细胞浆或细胞核呈棕黄色颗粒为阳性。光镜下切片按统一放大倍数(×400)，选肿瘤区阳性表达最强的5个高倍视野，数码拍照，输入图像分析软件Image-Pro Plus 6.0中，准确分割出阳性区域，测量单位光学密度值(Mean Density)。相同条件下，每个图片测量3次，以所得3个光密度值的均数作为该图片视野中CD83、CD1a的表达强度。以同一切片的5个视野各自测得的平均光密度值的均数作为该切片所代表的单样本的CD83、CD1a的表达强度。 1.4流式细胞术测定取10g标本，经脱蜡、水化、胰蛋白酶37℃恒温水浴震动消化30min，300目尼龙网过滤，生理盐水10min离心2次(500～800r/min)，去除细胞碎片。沉淀细胞PBS重悬并计数，取106个细胞，加入流式细胞检测管，离心弃上清，分别加入抗CD83-PE抗体、抗CD1a-APC抗体，混匀后室温避光孵育30min，1mL PBS稀释，离心弃上清，加固定液150μL上机检测。 1.5统计学处理采用SPSS13.0统计软件，采用χ2检验，以P0.05为差异有统计学意义。计量资料的均数比较采用独立样本的t检验，以P0.05为差异有统计学意义。 2结果