发布时间：2015-01-30 来源：人大经济论坛

研究凋亡素参与正常细胞核蛋白表达差异_临床医学专业毕业论文范文 1．引言凋亡素能够特异引起肿瘤细胞与转化细胞的凋亡，这种细胞凋亡是非P53 依赖的，而不能够导致正常细胞的凋亡，这与凋亡素的核定位有关。凋亡素是一种在细胞质与细胞核之间穿梭的蛋白。无论是在肿瘤细胞还是正常细胞内，凋亡素都能够通过核定位信号进入细胞核。然而在肿瘤细胞中，凋亡素被修饰，导致出核信号的失活，定位在细胞核内，引起肿瘤细胞的凋亡；而在正常细胞中，凋亡素又通过出核信号出核，定位在细胞浆内，不引起正常细胞的凋亡。 综上所述，肿瘤细胞与正常细胞之间的蛋白表达一定存在着某种差异，使得凋亡素在肿瘤细胞中被特异地修饰。本实验通过蛋白质组学的方法来寻找肿瘤细胞与正常细胞核内的蛋白表达差异，以期望能够进一步探讨凋亡素诱导肿瘤细胞特异凋亡的机制。 2．材料和方法 2.1 实验材料PureyieldTM Plasmid Midiprep System(Promega)、RPMI1640 细胞培养基、新生牛血清（GIBCO）、转染试剂LIPOFECTAMINE 2000(Invitrogen)、蛋白酶抑制剂（sigma）、pEGFP-C1、pEGFP-C1-apoptin 由伦敦大学医学院Tavassoli 博士惠赠，JM109 菌株由本室保存，HepG2 细胞、L02 细胞由本校遗传教研室馈赠。 2.2 pEGFP-C1-apoptin 载体的提取按照 Promega 公司PureyieldTM Plasmid Midiprep System 提取试剂盒进行质粒的提取。 2.3 细胞培养用含 RPMI1640、10%新生牛血清的培养液，置37℃、5%CO2 及饱和湿度的恒温箱中培养HepG2 细胞、L02 细胞，每2d 传代一次。 2.4 细胞转染进行 24 孔板贴壁细胞的瞬时转染，将pEGFP-C1-apoptin 质粒分别转染进HepG2 和L02两种细胞。 2.5 激光共聚焦检测apoptin 定位转染后24、 48h 将 24 孔细胞培养板取出,在各组细胞的培养基中加入 Hoechst 33342染液(终浓度为 10μ g/ml), 37℃恒温避光染色 15min, PBS 洗3 次,去除未结合的 Hoechst33342, 激光共聚焦荧光显微镜下观察,拍照。 2.6 细胞核蛋白提取用含 RPMI1640、10%新生牛血清的培养液，置37℃、5%CO2 及饱和湿度的恒温箱中培养转染24h、48h 后的HepG2 细胞、L02 细胞。收集上述细胞，常规消化，用PBS(ph7 .2)洗1 次，4℃ 1080rpm 离心5min。弃上清，细胞压积加缓冲液A 400μl，蛋白酶抑制剂2μl，混悬，冰上肿胀15 min，再加10％ NP-40 50μl，涡动10 s。10000