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HPLCELSD法测定芪红胶囊中黄芪甲苷的含量_药学专业论文

发布时间:2014-10-25 来源:人大经济论坛
【摘要】 目的 建立芪红胶囊中黄芪甲苷的含量测定方法,为芪红胶囊质量标准的研究提供依据。方法 采用HPLC法分离并测定了中药芪红胶囊中黄芪甲苷的含量。色谱条件:Diamnosil C18柱(460 mm×250 mm,5 μm),以乙腈水(体积比35∶65)为流动相;蒸发光散射检测器(ELSD)。 结果:此方法线性为2.53~15.18 μg,平均加样回收率为99.4%。结论 本方法精密度高,分离度良好,可用于中药芪红胶囊中黄芪甲苷的含量测定。 【关键词】 芪红胶囊;黄芪甲苷;高效液相色谱 Abstract:Objective To develop a method for determining the content of astragaloside IV in Qihong capsule.Methods Astragaloside IV was analyzed on an HPLC Diamnosil C18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) using acetonitrilewater (35∶65) as mobile phase.Results The calibration curve was linear in the range of 2.53-15.18 μg. The average recovery was 99.4%. Conclusions This method is accurate, reliable and reproducible, which can be used for the quality control of Qihong capsule. Key words:Qihong capsule; astragaloside IV; HPLC 芪红胶囊是由黄芪、红花,冰片、桃仁等多味药材制成的中药复方制剂,具有活血化淤、通络止痛的功效,临床主要用于治疗冠心病(气虚血淤型),疗效确切。方中黄芪是芪红胶囊的君药,其药用有效成分主要是黄芪甲苷(astragaloside IV)。为了控制药品的质量,本文选择黄芪甲苷作为含量测定指标,建立HPLCELSD法分离测定芪红胶囊中黄芪甲苷含量的方法,为中药芪红胶囊的质量标准研究提供依据。 1仪器与试药 1.1仪器Waters 600E泵高效液相色谱仪,Waters M32色谱工作站;SEDEX 55蒸发光散射检测器(法国)(漂移管温度60 ℃,增溢为7,气压2.1×105 Pa);Mettler AE240(十万分之一)天平(梅特勒-托利多上海仪器有限公司);SYZA石英亚沸高纯水蒸馏器(江苏信达仪器厂)。 1.2试药黄芪甲苷(中国药品生物制品检定所提供,供含量测定用,批号:0781200301);乙腈(色谱纯, Tedia Company, Inc., Fairfield, OH,USA);芪红胶囊(广州鑫升科技公司提供,规格:0.4 g/粒,批号:20060307,20060308,20060309)。 2方法与结果 2.1色谱条件的选择 Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm) (迪马公司产) 为色谱柱;乙腈水(体积比35∶65)为流动相;柱温:30 ℃;流速1.0 mL/min;SEDEX 55蒸发光散射检测器(漂移管温度60 ℃,增溢为7,气压2.1×105 Pa)。在此色谱条件下,黄芪甲苷与样品中其他组分分离良好,理论板数按黄芪甲苷色谱峰计大于3 000。色谱图见图1、2。 图1黄芪甲苷对照品HPLC图 略 图2芪红胶囊HPLC图 略 2.2对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品12.65 mg,置25 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。 2.3供试品溶液的制备精密称取样品8 g,加水50 mL使溶解,转移至分液漏斗中,用水饱和的正丁醇提取5次,每次30 mL,合并正丁醇液,以氨试液洗涤5次,每次20 mL,弃去氨试液,合并正丁醇液,蒸干,残渣用甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,作为供试品溶液。 2.4线性关系考察分别精密吸取上述对照品溶液5、10、15、20、30 μL,注入液相色谱仪,照上述色谱条件测定黄芪甲苷峰面积,以对照品进样量(m) 自然对数为横坐标、峰面积值(A) 自然对数为纵坐标,绘制标准曲线,测定结果表明,黄芪甲苷对照品在进样量2.53~15.18 μg范围内呈良好的线性关系,回归方程为:A=1.521 0m+10.666 2,r=0.999 7。 2.5精密度试验分别精密吸取上述对照品溶液10 μL, 连续进样5次, 测定黄芪甲苷峰面积值,求得黄芪甲苷峰面积值平均值为537 179,RSD为1.2%,结果表明仪器精密度良好。 2.6稳定性试验精密称取本品,照上述方法制备供试品溶液,精密吸取15 μL,在上述色谱条件下,每隔一定时间进样, 测定黄芪甲苷峰面积值, 求得黄芪甲苷峰面积值平均值为636 505,RSD值为1.6%,表明样品在24 h内基本稳定。 2.7回收率试验精密称取芪红胶囊6份,每份约8 g,照前述供试品溶液制备方法制备,精密吸取供试品溶液15 μL,进样,测定,计算含量,求得黄芪甲苷含量平均值为0.099 mg/粒,RSD为2.0%,表明本法测定的重复性良好。 2.8准确度试验采用加样回收法,取已知含量样品(黄芪甲苷含量为:0.099 mg/粒)6份,精密称取各约4 g,分别精密加入黄芪甲苷对照品,照供试品溶液制备方法制备,照上述色谱条件,精密吸取供试品溶液15 μL,进样,测定,计算,求得黄芪甲苷平均回收率为99.4%,RSD为2.0%。结果说明本法准确。 表1回收率试验结果 略 2.9 阴性对照试验取缺黄芪的各味药材按工艺制备成阴性对照溶液,照供试品的测定项下的方法测定,结果在黄芪甲苷对照品吸收峰位置处无干扰(见图3)。 2.10样品的测定取3批样品,分别按2.3项方法制得供试品溶液,分别精密吸取对照品溶液10 μL和20 μL,供试品溶液15 μL,注入液相色谱仪,测定,计算,3批样品黄芪甲苷含量的测定结果分别为0.099、0.136、0.114 mg/粒。 图3缺黄芪阴性对照HPLC图 略 3讨 论 3.1供试品溶液的制备由于黄芪甲苷类成分在正丁醇中的溶解度比较大,因此选用正丁醇进行提取,经回收试验证明方法可行。作者曾试验采用未经氨试液处理的供试品溶液进行测定,含量大大偏低,故供试品溶液经氨试液处理才能进行含量测定。 3.2检测器的选择黄芪甲苷的含量测定法有薄层扫描法[1~3],紫外检测的HPLC法[4]及HPLCELSD法[5~6],由于薄层扫描法对黄芪甲苷的含量测定结果误差大,紫外检测的HPLC法则选择203 nm的末端吸收波长来测定,其误差也很大,故目前专家建议采用HPLCELSD法测定,此方法减少了误差,满足了含量测定的要求,故本文也选择蒸发光散射检测器。 3.3流动相的选择HPLC测定选择了乙腈水(体积比35∶65),乙腈水(体积比30∶70),甲醇水(体积比35∶65)几种流动相体系,通过比较分离情况,确定了上述体系,该体系使各成分得到了较好的分离,满足定量的要求。 3.4本文以高效液相色谱法测定芪红胶囊中主要成分黄芪甲苷的含量,方法分析条件易于精确控制,待测成分易于分离,且具有较好的重现性和较高的精密度,为中药芪红胶囊的质量标准的制订提供了依据。 【参考文献】 [1] 曹正中,俞家华,陈萍.黄芪注射液中黄芪甲甙的薄层光密度法测定[J].药物分析杂志,1988,8(3):176-177. [2] 李晓蒙,李晓莹,徐位良,等. 糖康安颗粒质量标准研究[J].广东药学院学报,2002,18(3)∶169-171. [3] 刘金旗,时文霞,刘劲松,等.薄层扫描法测定健脑精喷雾剂中黄芪甲甙的含量[J].中药材,1996,19(10)∶529-530. [4] 阎汝南,王静竹,刘舒平,等.HPLC法测定黄芪中黄芪甲甙的含量[J].中国中药杂志,1998,23(7)∶398-399. [5] 吴永平, 徐永梅, 曹 园,等. HPLC-ELSD法测定黄芪提取物中黄芪甲苷的含量[J].中成药,2001,23(9):673-674. [6] 曹湘萍, 梁建宁, 何晓艳,等.HPLC-ELSD法测定乙肝宁颗粒中黄芪甲苷含量[J].中成药,2005,27(2):165-167.
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