HPLCELSD法测定芪红胶囊中黄芪甲苷的含量_药学专业论文
发布时间：2014-10-25
来源：人大经济论坛
【摘要】 目的 建立芪红胶囊中黄芪甲苷的含量测定方法，为芪红胶囊质量标准的研究提供依据。方法 采用HPLC法分离并测定了中药芪红胶囊中黄芪甲苷的含量。色谱条件：Diamnosil C18柱(460 mm×250 mm,5 μm)，以乙腈水(体积比35∶65)为流动相;蒸发光散射检测器(ELSD)。 结果：此方法线性为2.53～15.18 μg，平均加样回收率为99.4%。结论 本方法精密度高，分离度良好，可用于中药芪红胶囊中黄芪甲苷的含量测定。
【关键词】 芪红胶囊;黄芪甲苷;高效液相色谱
Abstract:Objective To develop a method for determining the content of astragaloside IV in Qihong capsule.Methods Astragaloside IV was analyzed on an HPLC Diamnosil C18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) using acetonitrilewater (35∶65) as mobile phase.Results The calibration curve was linear in the range of 2.53-15.18 μg. The average recovery was 99.4%. Conclusions This method is accurate, reliable and reproducible, which can be used for the quality control of Qihong capsule.
Key words:Qihong capsule; astragaloside IV; HPLC
芪红胶囊是由黄芪、红花，冰片、桃仁等多味药材制成的中药复方制剂，具有活血化淤、通络止痛的功效，临床主要用于治疗冠心病(气虚血淤型)，疗效确切。方中黄芪是芪红胶囊的君药，其药用有效成分主要是黄芪甲苷(astragaloside IV)。为了控制药品的质量，本文选择黄芪甲苷作为含量测定指标，建立HPLCELSD法分离测定芪红胶囊中黄芪甲苷含量的方法，为中药芪红胶囊的质量标准研究提供依据。
1仪器与试药
1.1仪器Waters 600E泵高效液相色谱仪，Waters M32色谱工作站;SEDEX 55蒸发光散射检测器(法国)(漂移管温度60 ℃，增溢为7，气压2.1×105 Pa);Mettler AE240(十万分之一)天平(梅特勒-托利多上海仪器有限公司);SYZA石英亚沸高纯水蒸馏器(江苏信达仪器厂)。
1.2试药黄芪甲苷(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：0781200301);乙腈(色谱纯, Tedia Company, Inc., Fairfield, OH,USA);芪红胶囊(广州鑫升科技公司提供，规格：0.4 g/粒，批号：20060307，20060308，20060309)。
2方法与结果
2.1色谱条件的选择 Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm) (迪马公司产) 为色谱柱;乙腈水(体积比35∶65)为流动相;柱温：30 ℃;流速1.0 mL/min;SEDEX 55蒸发光散射检测器(漂移管温度60 ℃，增溢为7，气压2.1×105 Pa)。在此色谱条件下，黄芪甲苷与样品中其他组分分离良好，理论板数按黄芪甲苷色谱峰计大于3 000。色谱图见图1、2。
图1黄芪甲苷对照品HPLC图 略
图2芪红胶囊HPLC图 略
2.2对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品12.65 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3供试品溶液的制备精密称取样品8 g，加水50 mL使溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取5次，每次30 mL，合并正丁醇液，以氨试液洗涤5次，每次20 mL，弃去氨试液，合并正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
2.4线性关系考察分别精密吸取上述对照品溶液5、10、15、20、30 μL，注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定黄芪甲苷峰面积，以对照品进样量(m) 自然对数为横坐标、峰面积值(A) 自然对数为纵坐标，绘制标准曲线，测定结果表明，黄芪甲苷对照品在进样量2.53～15.18 μg范围内呈良好的线性关系，回归方程为：A=1.521 0m+10.666 2，r=0.999 7。
2.5精密度试验分别精密吸取上述对照品溶液10 μL, 连续进样5次, 测定黄芪甲苷峰面积值，求得黄芪甲苷峰面积值平均值为537 179，RSD为1.2%，结果表明仪器精密度良好。
2.6稳定性试验精密称取本品，照上述方法制备供试品溶液，精密吸取15 μL，在上述色谱条件下，每隔一定时间进样, 测定黄芪甲苷峰面积值, 求得黄芪甲苷峰面积值平均值为636 505，RSD值为1.6%，表明样品在24 h内基本稳定。
2.7回收率试验精密称取芪红胶囊6份，每份约8 g，照前述供试品溶液制备方法制备，精密吸取供试品溶液15 μL，进样，测定，计算含量，求得黄芪甲苷含量平均值为0.099 mg/粒，RSD为2.0%，表明本法测定的重复性良好。
2.8准确度试验采用加样回收法，取已知含量样品(黄芪甲苷含量为：0.099 mg/粒)6份，精密称取各约4 g，分别精密加入黄芪甲苷对照品，照供试品溶液制备方法制备，照上述色谱条件，精密吸取供试品溶液15 μL，进样，测定，计算，求得黄芪甲苷平均回收率为99.4%，RSD为2.0%。结果说明本法准确。
表1回收率试验结果 略
2.9 阴性对照试验取缺黄芪的各味药材按工艺制备成阴性对照溶液，照供试品的测定项下的方法测定，结果在黄芪甲苷对照品吸收峰位置处无干扰(见图3)。
2.10样品的测定取3批样品，分别按2.3项方法制得供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液10 μL和20 μL，供试品溶液15 μL，注入液相色谱仪，测定，计算，3批样品黄芪甲苷含量的测定结果分别为0.099、0.136、0.114 mg/粒。
图3缺黄芪阴性对照HPLC图 略
3讨 论
3.1供试品溶液的制备由于黄芪甲苷类成分在正丁醇中的溶解度比较大，因此选用正丁醇进行提取，经回收试验证明方法可行。作者曾试验采用未经氨试液处理的供试品溶液进行测定，含量大大偏低，故供试品溶液经氨试液处理才能进行含量测定。
3.2检测器的选择黄芪甲苷的含量测定法有薄层扫描法[1～3]，紫外检测的HPLC法[4]及HPLCELSD法[5～6]，由于薄层扫描法对黄芪甲苷的含量测定结果误差大，紫外检测的HPLC法则选择203 nm的末端吸收波长来测定，其误差也很大，故目前专家建议采用HPLCELSD法测定，此方法减少了误差，满足了含量测定的要求，故本文也选择蒸发光散射检测器。
3.3流动相的选择HPLC测定选择了乙腈水(体积比35∶65)，乙腈水(体积比30∶70)，甲醇水(体积比35∶65)几种流动相体系，通过比较分离情况，确定了上述体系，该体系使各成分得到了较好的分离，满足定量的要求。
3.4本文以高效液相色谱法测定芪红胶囊中主要成分黄芪甲苷的含量，方法分析条件易于精确控制，待测成分易于分离，且具有较好的重现性和较高的精密度，为中药芪红胶囊的质量标准的制订提供了依据。
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