发布时间：2014-11-21 来源：人大经济论坛

辛伐他汀对肾移植后高脂血症患者RANTES及其受体CCR5 mRNA表达的_药学专业毕业论文            作者：史艳玲, 邹和群, 王玉新, 徐琴君, 唐孝达 【关键词】  ,肾移植     Effect of simvastatin on expression of RANTES and its receptor CCR5 mRNA in renal transplant recipients with hyperlipidemia 【Abstract】 AIM: To study whether hyperlipidemia after renal transplantation is related to the expression of RANTES (regulated on activation normal Tcell expressed and secreted) and its receptor CCR5 (chemokine receptor 5) mRNA in peripheral monocyte cells (PMCs) and to explore its therapy. METHODS:  Renal recipients were divided into normal lipidemia group (n=30) and hyperlipidemia group (n=30) according to the serum lipid level 6-8 months after transplantation. The patients in the hyperlipidemia group were treated with simvastatin for 1.5 months (1.5month treatment group) or 3 months (3month treatment group). The control group consisted of 30 healthy subjects. Serum total cholesterol (TC), triglyceride (TG), lowdensity lipoprotein (LDL), highdensity lipoprotein (HDL) were measured and RTPCR was used to detect the expression of RANTES and CCR5 mRNA in PMCs. RESULTS:  The renal function of all the patients was normal. TC, TG, LDL and expression of RANTES and CCR5 mRNA in the normal lipidemia group were lower than those in the hyperlipidemia group, but higher than those in control group (P0.05), and those in 3month treatment group were significantly lower than those in 1.5month treatment group (P0.05). CONCLUSION:  The expression of RANTES and CCR5 mRNA is involved in the earlystage chronic injury of kidney allografts. Hyperlipidemia can strengthen the increased expression of RANTES and CCR5 mRNA. Simvastatin can reduce the expression of RANTES and CCR5 mRNA in the kidney transplant recipients with hyperlipidemia. 【Keywords】 kidney transplantation；hyperlipidemia；RANTES；RTPCR；simvastatin 【摘要】 目的: 探讨肾移植术后高脂血症患者外周血RANTES (regulated on activation normal Tcell expressed and secreted)及其受体CCR5(chemokine receptor 5) mRNA表达及治疗. 方法: 根据患者肾移植术后6~8 mo的血脂水平分血脂正常组（n=30）和血脂增高组（n=30），血脂增高组又根据辛伐他汀治疗时间分1.5 mo治疗组（n=30）和3 mo治疗组（n=30），并设正常对照组（n=30），利用RTPCR检测各组患者外周血RANTES和CCR5 mRNA表达水平.  结果: 各组肾功能正常，胆固醇酯，三酰甘油，低密度脂蛋白水平均按对照组，血脂正常组，血脂增高组顺序递增(P0.05)，3 mo治疗组较1.5 mo治疗组有显著降低(P0.05)；RANTES及其受体CCR5 mRNA表达水平按对照组，血脂正常组，血脂增高组顺序递增，1.5 mo治疗组和3 mo治疗组均较血脂增高组有显著降低（P0.05)，而3 mo治疗组又明显低于1.5 mo治疗组(P0.05). 结论： RANTES及其受体CCR5 mRNA表达可能在移植肾慢性损伤早期起作用；高脂血症能加重已增高表达，辛伐他汀治疗可降低表达. 【关键词】 肾移植；高脂血症；RANTES；逆转录聚合酶链反应；辛伐他汀 0引言 肾移植后约半数以上患者发生脂代谢紊乱，主要表现为胆固醇（cholesterol, CH），三酰甘油(triglyceride, TG)，低密度脂蛋白（LDL）和极低密度脂蛋白（VLDL）升高，高密度脂蛋白（HDL）降低［1］. 高脂血症不但是移植后心血管疾病发生的危险因子，也是移植肾慢性排斥发生的重要原因［2］. 趋化因子（chemokine）受体CCR5（chemokine receptor 5）是RANTES（regulated on activation normal Tcell expressed and secreted）的主要受体. 我们应用RTPCR方法检测肾移植术后高脂血症患者外周血中RANTES及其受体CCR5 mRNA水平，并观察辛伐他汀降脂治疗对其影响如下. 1和方法 1.1材料 肾移植患者60例，原发病为慢性肾小球肾炎，移植前血清总胆固醇（total cholesterol,TC），TG水平正常；术后6~8 mo：① 血脂正常组：TC5.85 mmol/L或(和)TG1.70 mmol/L，30（男16，女14）例，年龄（40±10）岁；②血脂增高组：TC5.85 mmol/L或(和)TG1.70 mmol/L，30（男17，女13）例，年龄（41±9）岁；血脂增高组予辛伐他汀治疗1.5 mo和3 mo时收集标本，即为1.5 mo治疗组和3 mo治疗组. 对照组为健康体检者30(男15，女15)例，年龄（40±9）岁. 抽取空腹静脉血，分成2份，一份检测血脂水平，一份分离外周单个核细胞(peripheral mononuclear cell, PMNC) 抽提总RNA. 抽血前1 mo内无感染性疾病史. 淋巴细胞分离液Ficol购自上海生物制品所；Trizol，氯仿，异丙醇，MMLV逆转录酶、RNA酶抑制剂，0.1 mol/L DTT，随机引物，dNTP，购自Gibco公司；Taq DNA聚合酶，2.5 mmol/L MgCl2，琼脂糖，购自Promega公司. 1.2方法 血标本抽取PMNC转移至无Rnase的Ependoff管中，加Trizol 1 mL，剧烈震荡，室温放置5 min，加氯仿0.2 mL，2000 g 4℃离心15 min. 转移上清液至另一Ependoff管中，加异丙醇0.5 mL，室温静置10 min，12 000 g, 4℃离心15 min，弃去上清液，加750 mL/L乙醇1 mL，12 000 g, 4℃离心10 min；弃去上清液，室温干燥5~10 min，加EDPC水20 μL混匀，取1 μL以纯水稀释100倍，紫外分光光度计测A值与RNA浓度. RTPCR引物：Nucleotide上查找RANTES和CCR5基因序列，Primer3软件设计，Takara公司合成. 引物序列及扩增产物长度如下：RANTES上游引物 AGCTACTCGGGAGGCTAAGG，下游引物GAGGCATGCTGACTTCCTTC，产物长度276 bp；CCR5上游引物TAGTCATCTTGGGGCTGGTC，下游引物TGTAGGGAGCCCAGAAGAGA，产物长度168 bp；βactin上游引物TGGCACACCTTCTACAATGAGCT，下游引物CGTCATACTCCTTGCTCCACATCTGC，产物长度838 bp. 取RNA 1 μg,随机引物1 μL,dNTP 1 μL，加DEPC水至11.5 μL，70℃预变性5 min；加5×Buffer 5 μL, 0.1 mol/L DTT 2 μL,RNA酶抑制剂0.5 μL,MMLV逆转录酶 1 μL，37℃ 1 h，95℃ 5 min，加150 μL纯水稀释，取1 μL紫外分光光度计测A值与cDNA浓度. PCR反应：10×Buffer 5 μL,2.5 mmol/L MgCl2 4 μL,dNTP 200 μmol/L,Taq DNA聚合酶1.5 U、相应上下游引物各1 μL，加双蒸水至50 μL，95℃预变性3 min，进入循环：94℃30 s，57℃ 45 s，72℃ 1 min，共35个循，72℃保温10 min.  PCR产物10 μL,βactin产物1.5 μL, 2 kb DNA Marker 5 μL，15 g/L琼脂糖凝胶电泳30 min，紫外光下观察结果，凝胶成像系统拍照，Synegene tool软件进行图像分析，测产物条带的光密度，计算目标产物与βactin的比值. 学处理：组间比较采用随机区组设计方差分析，其余采用完全随机设计方差分析,如方差不齐采用非参数KruskalWallis，并进行各组间的两两比较. 2结果 2.1血脂水平与辛伐他汀治疗血脂增高组TC,TG和LDL水平显著高于对照组及血脂正常组，对照组，血脂正常组间无显著差异（Tab 1）；3 mo治疗组TC,TG和LDL水平显著低于1.5 mo治疗组（P0.05），3 mo治疗组HDL水平明显高于1.5 mo治疗组（P0.05, Tab 1）.表1血脂增高组辛伐他汀治疗后血脂水平及PMNC中RANTES,CCR5 mRNA表达（略） 2.2RANTES及CCR5 mRNA表达水平PMNC中RANTES及CCR5 mRNA表达水平按对照组，血脂正常组，血脂增高组