虾肝肠胞虫TaqMan-MGB荧光定量PCR检测技术的建立

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1 论文标题：虾肝肠胞虫TaqMan-MGB荧光定量PCR检测技术的建立

2 作者信息：肇慧君, 胡 强, 庞艳华：大连海关技术中心，辽宁 大连

3 出处和链接：肇慧君, 胡强, 庞艳华. 虾肝肠胞虫TaqMan-MGB荧光定量PCR检测技术的建立[J]. 水产研究, 2022, 9(3): 114-121. https://doi.org/10.12677/OJFR.2022.93013

4 摘要：近年来，虾肝肠胞虫病(Enterocytozoon hepatopenaei, EHP)严重威胁虾类健康成长，为了精准快速检测该病原，本文选取虾肝肠胞虫保守基因片段PTP2为靶序列，设计并合成TaqMan-MGB实时荧光定量PCR引物及探针，同时将扩增获得的特异PCR目的基因片段克隆到pMD18-T载体，得到重组质粒标准品。通过优化反应条件，建立了EHP TaqMan-MGB实时荧光定量PCR检测方法，并对该方法进行了灵敏度、特异性和重复性分析。试验结果证明，该反应体系的最佳退火温度为56℃，上下游引物浓度为10 μmol/L，探针浓度为5 μmol/L；灵敏度检测限最低可达到2.7 × 102拷贝/反应。特异性试验表明，该方法与WSSV、IHHNV和SHIV这3种水生动物病原无交叉反应，只与目标病原有特异性扩增。重复性试验显示，该方法具备良好的重复性及稳定性。采用研究建立的检测方法，初步应用在了实际临床样品检测中，结果显示，该方法与TaqMan荧光定量PCR方法具有类似的敏感性。以上结果显示，研究建立的EHP的TaqMan-MGB实时荧光定量PCR方法具有较高的敏感性、良好的特异性及重复性，适用于虾类及产品中肝肠胞虫的检测与监测。

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