隐–荧光DNA扩增

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1 论文标题：隐–荧光DNA扩增

2 作者信息：刘自厚：河南农业大学国际教育学院，河南 郑州；刘亮伟：河南农业大学生命科学学院，河南 郑州；农业部农业酶工程重点实验室，河南 郑州

3 出处和链接：刘自厚, 刘亮伟. 隐–荧光DNA扩增[J]. 微生物前沿, 2023, 12(1): 45-54. https://doi.org/10.12677/AMB.2023.121006

4 摘要：目的：隐–荧光(Hf: hidden fluorescent) DNA通过带荧光素及10 nt之内淬灭基团的Hf引物扩增。方法：本研究设计Hf_Pf引物带有dT12_Fam荧光素-dT16_BHQ1淬灭基团，扩增5851 bp HfDNA pET28a-xylanase，探讨Hf_Pf引物Tm (退火温度)适合计算器、HfDNA扩增条件、T5 DNA酶(T5exo)切割产物检测、及T5exo酶切动力学。结果：Hf_Pf Tm计算器为Oligo、IDT，经非等量引物PCR优化扩增HfDNA，激光共聚焦定性检测HfDNA酶切产物Fam荧光、酶标仪定量检测荧光值19,683 a.u。根据HfDNA浓度–荧光值方程，T5exo酶促动力学参数Km 0.1 nM，弥补解离常数KD不足。结论：本研究扩增隐–荧光HfDNA，提供了DNA酶学研究新材料。

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关键词：DNA 生命科学学院 Hidden 重点实验室 河南农业