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几丁寡糖对脂肪酸代谢紊乱的抑制作用及分子机制研究
目的:探讨几丁寡糖(Chitin oligosaccharide,NACOS)对机体脂代谢紊乱的抑制作用及其潜在的分子机制。方法:体外细胞学实验:(1)MTT法筛选用药浓度:分别采用浓度梯度的PA(0、25、50、100和200μM)预先作用24 h,MTT法用酶标仪检测HepG2细胞增殖的OD值,计算细胞存活率,判断最适PA浓度。
将HepG2细胞经NACOS(0、50、100μg/ml)预处理12 h后,加入PA处理24 h,MTT法检测细胞存活率,判断最适NACOS浓度。(2)油红O染色法:HepG2细胞经NACOS(0、50、100μg/ml)预处理12 h后,再用PA刺激24 h。
倒置显微镜观察HepG2细胞形态学,以此评价NACOS对PA诱导所致的HepG2细胞中脂质沉淀的影响以及NACOSA抑制HepG2细胞活化的最适浓度。(3)实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)检测HepG2细胞经PA刺激不同时间后过氧化物酶体增殖体受体共激活因子-1α(PGC1α)、炎症因子IL-1β、乙酰辅酶 ...
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