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表达蛋白的分离与纯化
大肠杆菌表达蛋白以可溶和不溶两种形式存在，需要不同的纯化策略。现在，许多蛋白质正在被发现而事先并不知道它们的功能，这些自然需要将蛋白质分离出来后，进行进一步的研究来获得。分析蛋白质的方法学现已极大的简化和改进。现已有多种方法可以利用，蛋白质纯化策略也已实际可行。目前，待研究蛋白或酶的基因的获得已是相当普遍的事。可诱导表达系统特别是Studier等发展的以噬菌体T
7RNA聚合酶为基础的表达系统的出现使人们能近乎常规地获得高表达水平的蛋白，表达水平可达细胞蛋白的2%以上，有些甚至高达50%。
一、可溶性产物的纯化（融合6×His·Tag的表达蛋白）
（一）试剂准备
1．Ni-IDA/Ni-NTA Resin
2．5 M NaCl溶液
292.2 g NaCl（MW 58.44）溶解至ddH
2O, 定容至1 L。
3．5 M Imidazole溶液
340.4 g Imidazole（MW 68.08）溶解至ddH
2O, 定容至1 L, 4
℃保存。4．1 M Tris-HCl溶液（pH 8.0）
121.14 g Tris base（MW 121.14）溶解至d ...

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关键词：EMS MSA Base 大肠杆菌 蛋白质