实验三细胞的传代培养与冻存专家讲座

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试验目标
1.掌握细胞传代培养方法2.掌握细胞冻存方法3.建立严格无菌操作观念

试验原理
  传代培养是组织培养常规保种方法之一，也是几乎全部细胞生物学试验基础。  当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶，细胞才能继续生长，这一过程就叫传代。传代培养可取得大量细胞供试验所需。  传代要在严格无菌条件下进行。

试验原理
利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保留，能够使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特征保留起来，这么在需要时候再复苏细胞用于试验，起到了细胞保种作用。还能够利用细胞冻存形式来购置、寄赠、交换和运输一些细胞。 细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%-15%甘油或二甲基亚砜(DMSO)，可使溶液冰点降低，加之在迟缓冻结条件下，细胞内水分透出，降低了冰晶形成，从而防止细胞损伤。 采取"慢冻快融"方法能很好地确保细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。

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关键词：细胞生物学 培养基 方法能 二甲基 保护剂