布比卡因神经毒性大鼠海马基因表达谱的研究

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布比卡因神经毒性大鼠海马基因表达谱的研究
目的观察布比卡因引起大鼠神经毒性海马基因表达谱的变化,在基因水平探究布比卡因中枢神经毒性的机制。方法健康雄性8周SD大鼠6只,随机分为布比卡因组(n=3)及对照组(n=3),各组组内大鼠随机编号。
大鼠适应性喂养1周后,置于自制麻醉箱内七氟醚吸入麻醉,尾静脉穿刺置管,布比卡因组泵注0.75%布比卡因,直至大鼠出现烦躁、共济失调、惊厥发作等毒性反应,脑电图出现惊厥波形后立即取材,对照组泵注生理盐水。大鼠断颈处死,解剖显微镜下取海马组织加入RNase-Free的生理盐水,清洗,液氮冷冻保存。
海马组织总RNA采用Trizol试剂一步法提取,RNA的纯度和含量用紫外分光光度计测量。根据Oligotex m RNA Midi Kit纯化m RNA。
以四种脱氧核苷酸作原料,以m RNA为模板,在逆转录酶作用下合成单链c DNA;再用单链c DNA为模板,以四种脱氧核苷酸作原料,继续合成DNA另一条链,两条DNA链合成双链c DNA。然后以c DNA为模板,以Cy3-DTP、Cy5-DTP为原料分别标记布比卡因组和对照组转录的c RNA。
用RNeasy ...

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