大肠杆菌感受态细胞制备实验(
CaCl2
法)细胞经过一些特殊方法(电击法、
CaCl2
法)等处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,成为能允许外源
DNA分子进入的细胞,即感受态细胞(
Compenent cells
)。1实验方法原理:
带有外源
DNA的重组质粒,在体外构建后,导入宿主细胞,随着细胞的大量复制、繁殖,才能够有机会获得纯的重组质粒
DNA,该过程称之为转化过程。受体细胞经过一些特殊方法(如:
CaCl2
,RuCl
等化学试剂)的处理后,细胞膜的通透性发生变化,能容许外源
DNA的载体分子通过。
2实验材料、试剂、仪器耗材:
E. coli DH5
α菌株LB固体培养基、
LB液体培养基、
CaCl2
、硫酸镁、
SOB、TFB等培养皿、恒温摇床、聚丙烯管、电热恒温培养箱、台式高速离心机、无菌工作台、烧瓶、恒温水浴锅、低温冰箱、制冰机、分光光度计、微量移液枪、锥形瓶、试管等
3实验步骤:
1、从37℃培养16-20 h
的平板中挑取一个单菌落
(直径2-3 mm)
,转到一个含有
100 ml LB
或SOB培养基的
1L烧瓶中。于
37℃剧烈振摇培养
3 h。 ...


雷达卡


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