什么是高通量测序?
高通量测序技术(High-throughput sequencing,HTS)是对传统 Sanger 测序(称为一代
测序技术)革命性的改变, 一次对几十万到几百万条核酸分子进行序列测定, 因此在有些文献中
称其为下一代测序技术(next generation sequencing,NGS )足见其划时代的改变, 同时高
通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能, 所以又被称为深度
测序(Deep sequencing)。
什么是 Sanger 法测序(一代测序)
Sanger 法测序利用一种 DNA 聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终
止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷
酸三磷酸(dNTP),并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于 ddNTP 缺乏
延伸所需要的 3-OH 基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在 G、A、T 或 C 处终止。终止点由
反应中相应的双脱氧而定。每一种 dNTPs 和 ddNTPs 的相对浓度可以调整,使反应得到一组
长几百至几 ...


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