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维生素A和锌摄入对大鼠卵巢脂质过氧化影响_药学专业毕业论文

发布时间:2014-11-16 来源:人大经济论坛
维生素A和锌摄入对大鼠卵巢脂质过氧化影响_药学专业毕业论文 维生素A(VA)和锌(Zn)均是机体生长发育必需的微量营养素,但过量摄入VA和Zn对机体具有一定的损伤作用。研究发现,两者的过量可降低脾脏的抗氧化功能,造成脂质过氧化损伤〔1〕。本研究通过建立初成年SD雌性大鼠VA和Zn过量摄入模型,探讨VA过量、Zn过量、VA和Zn联合过量对初成年雌性大鼠生殖系统的影响,从氧化应激角度探讨过量摄入VA、Zn对雌性大鼠生殖系统的可能毒性机制。 1  与方法 11  材料  111  实验动物  动情周期正常的初成年健康SD雌性大鼠(SPF级)72只,8周龄,体重(180±15)g,(甘肃学院实验动物中心,动物证号:SCXK(甘)2004-007)。 112  试剂  VA醋酸酯(粉剂),纯度为325万U/g(北京嘉康源化工有限公司);硫酸锌(ZnSO4·7H2O),分析纯(莱阳化工实验厂);超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)。 113  仪器  722型分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);SHA-B型水浴恒温振荡器(常州国华电器有限公司);TGL-6G-A型高速冷冻离心机(上海安亭化学仪器厂);120型台式天平(德国赛多利斯天平有限公司)。 12  方法  121  剂量选择与分组  阴道涂片法连续涂片10d,筛检动情周期连续2次为4~5d的初成年健康SD雌性大鼠72只,分笼单只喂养,喂饲营养均衡饲料,饮双蒸水,随机分为6组,每组12只,每日定时等容积(05ml)灌胃给予大鼠受试物,具体剂量〔2〕为,正常对照组(CG):双蒸水05ml/d;Zn实验组(ZnG):累计剂量相当于大鼠20倍推荐摄入量(RNI);VA实验组(VAG):累计剂量相当于大鼠30倍RNI;VA和Zn联合实验I组[(VA+Zn)IG]:VA和Zn累计剂量分别相当于大鼠10倍、20倍RNI;VA和Zn联合实验Ⅱ组[(VA+Zn)ⅡG]:VA和Zn累计剂量分别相当于大鼠30倍、20倍RNI;VA和Zn联合实验Ⅲ组,[(VA+Zn)ⅢG]:VA和Zn累计剂量分别相当于大鼠50倍、20倍RNI,1次/d,连续30d,期间正常喂饲双蒸水,每隔3d称重1次。 122  卵巢组织匀浆制备  于染毒第31d处死大鼠,分离血清,卵巢称重后剪碎,用玻璃匀浆器加入001mmol/L Tris-HCl缓冲液[001mol/L蔗糖、01mmol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)]制成10%(m/v)组织匀浆,5000r/min离心10min,取上清液待测。 123  指标测定  血清和卵巢组织中SOD、GSH-Px活性、T-AOC、MDA含量的测定依据试剂盒(南京建成生物工程研究所)说明书进行,卵巢组织蛋白以总蛋白浓度来校正。 13  分析  采用SPSS115软件进行单因素方差分析,并进行对照组与实验组的两两比较。 2  结果 21  VA和Zn摄入对SOD、GSH-Px活性的影响  在卵巢组织中,各实验组SOD、GSH-Px活性与CG比较明显降低各实验组与CG比较,差异均有统计学意义,(P001);(VA+Zn)ⅡG与ZnG比较GSH-Px活性降低(P005);(VA+Zn)ⅡG与VAG比较GSH-Px活性降低(P005);(VA+Zn)ⅡG与(VA+Zn)ⅢG比较GSH-Px活性降低(P005)。在血清中,各实验组SOD活性与CG比较,除ZnG降低外,其余各实验组均升高,但差异无统计学意义;(VA+Zn)IG与ZnG比较SOD活性升高(P005),各实验组GSH-Px活性与CG比较,除ZnG、(VA+Zn)IG降低外,其余各实验组均升高,但差异无统计学意义;(VA+Zn)ⅢG与ZnG比较GSH-Px活性升高(P005),见表1。 表1  VA和Zn摄入对雌性大鼠卵巢及血清SOD活性、GSH-Px活性的影响(略) 注:与CG比较,a P001;与ZnG比较,b P005;与VAG比较,c P005;与(VA+Zn)ⅡG比较,d P005 22  VA和Zn摄入对T-AOC活力、MDA含量的影响  在卵巢组织中,各实验组T-AOC活力与CG比较明显降低(各实验组与CG比较,差异均有统计学意义,P001,其中(VA+Zn)IG和ZnG与CG比较,P005;各实验组MDA含量与CG比较,除ZnG与VAG升高外,其余各联合实验组均降低,但差异无统计学意义;(VA+Zn)IG与ZnG比较,MDA含量降低(P005);(VA+Zn)ⅢG与ZnG比较,MDA含量降低(P005)。在血清中,各实验组T-AOC活力与CG比较降低,(VA+Zn)ⅡG和(VA+Zn)ⅢG与CG比较,差异有统计学意义,P005,各实验组MDA含量与CG比较均降低;(VA+Zn)ⅢG与CG比较,差异有统计学意义(P005);(VA+Zn)ⅢG与(VA+Zn)IG比较,MDA含量降低P005,见表2。 表2  VA和Zn摄入对雌性大鼠卵巢及血清T-AOC活力、MDA含量的影响(略) 注:与CG比较,a P005,b P001;与ZnG比较,c P005;与(VA+Zn)IG比较,d P005 3  讨论 摄入大剂量VA可引起急性、慢性及致畸毒性〔3,4〕,过量摄入Zn可以损害免疫器官和免疫功能〔5,6〕,VA和Zn具有某些相似的生理功能,可能具有协同效应〔7,8〕。本研究观察到过量摄入VA、Zn能引起大鼠卵巢的氧化应激。SOD与GSH-Px作为酶系和非酶系自由基清除剂,对维持机体抗氧化能力稳定起关键作用,各实验组卵巢组织中SOD活性、GSH-Px含量有不同程度降低,说明过量摄入VA、Zn可抑制SOD活性,使GSH-Px含量减少,破坏机体氧化平衡状态,从而使细胞抗氧化应激能力下降,而氧化应激会进一步引起脂质过氧化、巯基耗竭等氧化性损伤。T-AOC是机体防御体系之一,其能力强弱与健康程度存在着密切联系,该体系有酶促和非酶促2个体系,这种机能的降低常常导致各种疾病的产生,而过量摄入VA、Zn所致的各实验组卵巢组织中T-AOC的降低,更进一步证实过量VA、Zn所致脂质过氧化损伤作用加剧。在本实验研究剂量下,过量摄入VA、Zn对大鼠卵巢功能已产生一定的影响,引起卵巢组织的氧化损伤,表现在抗氧化系统活性降低,MDA增加,由此调节卵巢抗氧化系统的活性,这可能是过量摄入VA和Zn对生殖系统损伤的毒理机制之一。 【参考文献】     〔1〕 周源苑,王玉,马剑华.维生素A和锌过量摄入对大鼠脾脏的损伤作用[J].中国卫生,2006,22(9):1055-1056. 〔2〕 马剑华,王玉,张格祥,等.过量摄入维生素A和锌对肝脏细胞周期的影响[J].中国公共卫生,2005,21(8):967-969. 〔3〕 周建烈.维生素A的缺乏、补充与中毒[J].中国临床营养杂志,2000,8(4):262-264. 〔4〕 王英姿.浓缩鱼肝油致急性维生素A中毒11例报告[J].中国农村卫生事业,2003,23(5):63. 〔5〕 贾存英.缺锌与补锌[J].微量元素与健康研究,2001,18(1):77. 〔6〕 Fengyuan Piao,Kazuhit Yokoyama,Ning Ma,et al.Subacute toxic effects of zinc on various tissues and organs of rats[J].Toxicology Letters,2003,145:28-35. 〔7〕 梁鸿雁,高宏伟,曲永利,等.锌与维生素A互作效应的研究[J].四川畜牧兽医,2003,30(5):38-39. 〔8〕 李云,罗杰,王瑞淑.维生素A的致畸性以及锌对其致畸作用的影响[J].华科大学,2002,33(4):613-616.
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