脑梗死患者Hcy及MTHFR基因多态性与颈动脉IMT的关系_药学专业毕业论文范文
发布时间：2014-11-14
来源：人大经济论坛
脑梗死患者Hcy及MTHFR基因多态性与颈动脉IMT的关系_药学专业毕业论文范文
【摘要】 目的 探讨Hcy、MTHFR C677T基因多态性与颈动脉IMT及脑梗死之间的关系。方法 观察42例脑梗死患者和40例对照者，用循环酶法测定Hcy水平，采用聚合酶链反应－限制片长多态性方法检测MTHFR基因多态性，用彩色多普勒检查颈动脉IMT。结果 病例组血清Hcy 浓度显著高于对照组；Hcy是颈动脉IMT增厚及脑梗死的促进因素；MTHFR基因多态性非颈动脉IMT增厚及脑梗死的危险因素。结论 血清Hcy升高是动脉粥样硬化及脑梗死的独立危险因素，单纯的MTHFR尚不能认为是动脉粥样硬化及脑梗死的独立危险因素。
【关键词】 脑梗死；同型半胱氨酸；5，10－亚甲基四氢叶酸还原酶；颈动脉IMT
The relationship between homocysteine，MTHFR gene polymorphism and carotid intima-media thickness in cerebral infarction patients
【Abstract】 Objective To investigate the relationship of homocysteine(Hcy) level and genetic polymorphisms of methylenetetrahydrofolate reductase(MTHFR) related to homocysteine metabolism with carotid intima-media thickness(IMT)in cerebral infarction patientsMethods In 42 cerebral infarction patients and 40 healthy people，serum Hcy level was measured by cyclophorase assay；MTHFR genetic C677T polymorphism was determined by polymerase chain reaction；carotid intimal-medial wall thickness was determined by the use of the duplex ultrasonographyResults The Hcy level in the patient group was significantly higher than that in the control group (P0001) Hcy is related to the thickness of carotid intimal-medial thikness and cerebral infarction even after controlling for other traditional risk factors，but MTHFR genetic C677T polymorphism is notConclusion Serum Hcy but not MTHFR is the risk factor of artherosclerosis and cerebral infarction
【Key words】 cerebral infarction； homocysteine；5，10-methylenetetrahydrofolate reductase； carotid intima-media thickness
近年来，高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia，Hhcy)与血管病的关系日益引起重视。对Hhcy致脑梗死机制的研究主要集中在对动脉粥样硬化的影响上。 5，10－亚甲基四氢叶酸还原酶(Methylenetetrahydrofolate reductase， MTHFR) C677T 突变是引起Hhcy的主要遗传因素。颈动脉内膜－中膜厚度(intima－media thickness，IMT)作为反映全身动脉粥样硬化的一项早期指标已用于［1］。本研究目的在于探讨Hcy、MTHFR基因多态性与IMT及脑梗死之间的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 病例组来自2006年3月1日~10月31日北京同仁医院及普仁医院神经内科连续住院发病1周内的脑梗死患者，符合1995年第四届全国脑血管病学术会议制定的诊断标准，均经头颅CT 或MRI确诊，排除严重心脏疾病、急慢性肝肾功能不全、恶性肿瘤、酒精或物滥用者及近3个月服用叶酸、VitB12、VitB6者，共42例，男31例，女11例，平均669±100岁。正常对照组来自同期健康体检及志愿者， 既往无肝肾功能不全、心脑血管病及神经系统病史，共40例，男29例，女11例，平均626±93岁。
1.2 血清Hcy水平的测定 取受检者空腹血3ml， 1ｈ内分离血清，血清标本-20℃保存备检。Hcy测定仪器采用贝克曼CX7生化仪；Hcy检测试剂盒采用北京九强公司生产的Hcy010GB180Z Hcy检测试剂盒，荧光检测器检测波长340ｎｍ，进样量18μｌ。
1.3 颈动脉IMT的检测 应用 EP LOGZQ9 双功能彩色多普勒超声仪检查，检查部位包括双侧颈总（CCA）、颈内动脉(ICA)，IMT于CCA分叉近端1cm处后壁及分叉水平上方、球部以远1cm处测量或IMT最厚处，左右颈动脉各测量3次，取3次的平均值，IMT 超过10mm为颈动脉内膜增厚。
1.4 MTHFR C677T基因多态性检测 （1）提取外周血DNA。（2）PCR 体外基因扩增：引物根据文献设计［2］，由上海生工生物工程技术有限公司合成， P1:５'-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3'； P2: '-AGGACGGTGCGGTGAAGAGTG-３'。引物2OD，去离子水200μl备用。ＰＣＲ反应体系为天根生物工程公司提供的25μl反应体系（PCRPreMix）。加入模板4μl、引物Ｐ１和Ｐ２各1μl，再加去离子水配至25μl。循环条件：预变性94℃ 5min，解链94℃ 30s，退火62℃ 30s，延伸72℃ 30s，35循环周期后72℃再延伸7min。2%琼脂糖凝胶电泳检查PCR扩增产物，扩增片段大小为198b，置－20℃冰箱保存待用。(3)PCR扩增产物的限制性内切酶片段长度多态性分析： PCR扩增产物10μl，HinfⅠ１μl（10ｕ），缓冲液2μl，用去离子水补足至20μl，37℃水浴消化6h。3％琼脂糖凝胶电泳检查酶切结果。
1.5 学方法 用SPSS11.5软件进行统计分析，计量资料用±s表示。Hcy呈偏态分布，以几何均数和四分位数间距表示。对各组数据进行正态性，对不符合正态分布的数据进行转换使其符合正态分布。等位基因频率= (纯合子例数×2+杂合子例数) ×1/ 2×1/n (n代表总例数)。计数资料用卡方检验，计数资料用方差分析，颈动脉IMT及脑梗死的危险因素用Logistic 多元回归分析。
2 结果
2.1 MTHFR基因型和等位基因频率分布 脑梗死组与正常对照组C/C型与 C/T及T/T基因型频率分布有统计学差异(P＝0001和P=0003) C/T型与T/T型频率分布无统计学差异(P005)。脑梗死组与正常对照组C/T等位基因分布差异有显著性 (P001)。见表1。表1 2组MTHFR基因型及T等位基因频率 例(%)组别 例数 MTHFR基因型 C/C C/T T/T 等位基因 T C病例组 42 5(119)* 23(548) 14 (333) 51(607)** 33 (393)对照组 40 19(475)* 13(325) 8(200) 29(362) 51(638) 注：组内比较*P0017，与对照组比较**P001
2.2 血清Hcy水平的比较
2.2．1 不同基因型血清Hcy水平比较 脑梗死组与正常对照组C/C、 C/T及T/T基因型血清Hcy水平均呈递增的趋势，但无统计学差异（P005）。脑梗死组血清Hcy水平较正常对照组高，差异有显著性（P0001）。见表2。表2 MTHFR各基因型Hcy的水平组别 例数 C/C C/T T/T病例组 42* 2230(2040~2480) 2259 (1540~3040) 2634(1735~3910)对照组 40 1126 (914~1210) 1295(1010~1635) 1644(1398~1780) 注：与对照组比较*P0001
2.2．2 不同叶酸水平情况下血清Hcy水平比较 根据血清叶酸水平分为叶酸正常组和叶酸降低组。正常对照组与脑梗死组的Hcy水平在去除血清叶酸水平的影响后，C/C基因型的Hcy水平较C/T及T/T型低，差异有显著性(P001和P0001)，见表3。表3 血清叶酸及MTHFR基因多态性与Hcy的关系 (±s)组别 例数 C/C C/T T/T正常叶酸组 65 1245±480 1554±475* 2108±1010**叶酸降低组 17 2410±1102 3660±1680* 5767±2547** 注：与CC组比较*P001，与CC组比较**P0001
2.3 IMT与Hcy、MTHFR基因多态性及其他动脉粥样硬化危险因素间的相关分析 以颈动脉IMT是否增厚为因变量，Hcy、MTHFR基因多态性、性别、年龄、吸烟、高血压、糖尿病、脑血管病史、收缩压、舒张压、血糖、纤维蛋白原、叶酸、TC、 HDL、TG 和LDL 为自变量，进行Logistic回归分析显示Hcy(P=0022)、年龄(P＝001)及吸烟(P=0042) 是CCA IMT的危险因素。Hcy（P=0001）、血糖（P=0 021）、高血压病史(P=0000)是ICA IMT的危险因素。
2.4 脑梗死与Hc
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