关于本站
人大经济论坛-经管之家：分享大学、考研、论文、会计、留学、数据、经济学、金融学、管理学、统计学、博弈论、统计年鉴、行业分析包括等相关资源。
经管之家是国内活跃的在线教育咨询平台!
经管之家新媒体交易平台
提供"微信号、微博、抖音、快手、头条、小红书、百家号、企鹅号、UC号、一点资讯"等虚拟账号交易，真正实现买卖双方的共赢。【请点击这里访问】
TOP热门关键词
从噬菌体表面展示环状7肽肽库中筛选葡萄球菌B型肠毒素抑制剂_药学专业毕业论文作者：李韩平，周宏，郑玉玲，邓小红，马茹，姜永强【关键词】葡萄球菌B型肠毒素ScreeninginhibitorofStaphylococcalenterotoxinBfromra ...
免费学术公开课,扫码加入 |
从噬菌体表面展示环状7肽肽库中筛选葡萄球菌B型肠毒素抑制剂_药学专业毕业论文
作者：李韩平，周宏，郑玉玲，邓小红，马茹，姜永强
【关键词】 葡萄球菌B型肠毒素Screening inhibitor of Staphylococcal enterotoxin B from random circular 7mer peptide library displayed on phage
【Abstract】 AIM: To obtain the specific peptide which can bind with SEB and inhibit SEBs enterotoxin activity by panning from the random circular 7mer polypeptide libraries. METHODS: The affinity of peptide and the competitive activity of the synthetic peptide with that of antiSEB monoclonal antibody (McAb) were detected respectively by PhageELISA and competition ELISA. Animal experiment was performed to assess the suppressive effect of the screened peptide on the toxicity of SEB and its enterotoxin. RESULTS: The circular 7mer peptide obtained by panning suppressed the multiplication of spleen lymphocytes in mice. At the ratio of 160:1 (SEB: synthetic 7mers peptide), the peptide protected the little cats from attack of enterotoxin and the survival rate of mice treated with the screened peptide was significantly higher compared with that of the control group. CONCLUSION: The obtained peptide specifically combines with SEB and suppresses its enterotoxin activity, which paves the way for the development of SEB inhibitors.
【Keywords】 staphylococcal enterotoxin B; peptide library; screening; inhibitor
【摘要】 目的： 拟通过生物淘选从噬菌体表面展示环状7肽肽库中筛选出与葡萄球菌B型肠毒素(Staphylococcal enterotoxin B, SEB)结合并能抑制该毒素毒性效应的特异性短肽. 方法： 采用PhageELISA来鉴定所得目的肽的亲和性；利用竞争ELISA研究合成肽与SEB mAb竞争结合SEB的情况；通过动物实验考察其抑制SEB的超抗原特性和肠毒活性情况. 结果： 筛选所得短肽在一定浓度范围内可以抑制SEB对鼠脾淋巴细胞的激活；合成肽与SEB质量比160∶1下，合成肽可较好地抑制SEB对乳猫的肠毒活性，并对SEB引起的小鼠致死具有明显保护作用. 结论： 得到了能与SEB特异结合并能抑制SEB超抗原特性和肠毒活性的短肽.
【关键词】 葡萄球菌B型肠毒素；肽库;筛选;抑制剂
0引言
葡萄球菌B型肠毒素(Staphylococcal enterotoxin B, SEB)［1］是超抗原(SAg)家族的主要成员之一，该毒素可以造成食物中毒，严重时甚至导致致死性休克. SEB中毒后缺乏特异的治疗手段，因此研究SEB的特异高效抑制剂具有重大的意义. 我们利用固相筛选方法，即以SEB作为亲和靶标蛋白，从环状7mer肽噬菌体文库中筛选到与SEB结合，并能抑制该毒素毒性效应的噬菌体克隆. 结果表明，所筛选环状7mer肽在细胞水平上可抑制SEB对小鼠脾细胞的激活，在整体动物水平上对SEB导致的毒性具有一定保护作用.
1材料和方法
1.1材料
环状7mer肽噬菌体文库( Random circular 7mers peptide library displayed on phage)为New England BioLabsInc产品; M13噬菌体单链DNA提取试剂盒为Qiagen公司产品； SEB单克隆抗体由本室保存; DGal(D半乳糖)为Sigma产品；抗M13噬菌体mAb、CM Sepharose FF为Amesham产品; BCA蛋白定量试剂为Pierce产品.乳猫BALB/C实验动物由军事医学科学院丰台实验中心提供并饲养.
1.2方法
随机肽库的扩增、定量按照所附试剂盒说明书进行；纯化按QIAprepM13 Handbook进行. 亲和靶标蛋白SEB的分离纯化与定量按文献［2］方法进行. 依据优势噬菌体阳性克隆序列合成相应的多肽,由军事医学科学院六所合成, 并进行了多肽纯化和脱盐处理,合成多肽的纯度达95%以上. 将纯化的SEB与0.1 mol/L NaHCO3(pH 8.6)相混合, 制成质量浓度为1 g/ L的溶液,取100 μL混合液加于酶联条微孔进行包板固定，于4℃过夜；次日弃包被液后，加200 μL浓度为 50 g/L BSA于酶联孔中进行封闭，37℃结合2 h,间隙振荡；弃封闭液，取100 mL/L TBST液200 μL洗涤6次,间隔为5 min/次,然后将10 μL肽库原液加于含有100 μL TBST的酶联孔中,室温轻摇过夜;次日弃未结合的噬菌体,取100 ml/L TBST 200μL洗涤10次,间隔为3 min/次,最后加80 μL洗脱缓冲液,室温轻柔吹打10 min后,将洗脱得到的噬菌体转入微量离心管中,立即加入15 μL 1 mol/L TrisHCL(pH 9.1)进行中和. 将所得噬菌体进行感染、扩增、纯化后进行下一轮筛选. 在后续的筛选中TBST的浓度增为500 mL/L. 随机挑取第3轮噬菌体单克隆进行培养后进行PhageELISA分析及DNA序列测定. 将SEB包被酶联板，经30 g/L BSA封闭后加入培养好的单克隆上清，采用PhageELISA法检测SEB与噬菌体的结合情况. ssDNA的提取
「经管之家」APP：经管人学习、答疑、交友，就上经管之家！
免流量费下载资料----在经管之家app可以下载论坛上的所有资源，并且不额外收取下载高峰期的论坛币。
涵盖所有经管领域的优秀内容----覆盖经济、管理、金融投资、计量统计、数据分析、国贸、财会等专业的学习宝库，各类资料应有尽有。
来自五湖四海的经管达人----已经有上千万的经管人来到这里，你可以找到任何学科方向、有共同话题的朋友。
经管之家（原人大经济论坛），跨越高校的围墙，带你走进经管知识的新世界。
扫描下方二维码下载并注册APP
免流量费下载资料----在经管之家app可以下载论坛上的所有资源，并且不额外收取下载高峰期的论坛币。
涵盖所有经管领域的优秀内容----覆盖经济、管理、金融投资、计量统计、数据分析、国贸、财会等专业的学习宝库，各类资料应有尽有。
来自五湖四海的经管达人----已经有上千万的经管人来到这里，你可以找到任何学科方向、有共同话题的朋友。
经管之家（原人大经济论坛），跨越高校的围墙，带你走进经管知识的新世界。
扫描下方二维码下载并注册APP
您可能感兴趣的文章
人气文章
本文标题：从噬菌体表面展示环状7肽肽库中筛选葡萄球菌B型肠毒素抑制剂_药学专业毕业论文
本文链接网址：https://bbs.pinggu.org/jg/bylw_yaoxuebiyelunwen_122152_2.html
2.转载的文章仅代表原创作者观点,与本站无关。其原创性以及文中陈述文字和内容未经本站证实,本站对该文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性，不作出任何保证或承若；
3.如本站转载稿涉及版权等问题,请作者及时联系本站,我们会及时处理。
